名方甘草（水炙）41.40 g

2 方法与结果

2.1 18批黄连汤物质基准对应实物的经典基准制备

对黄连汤煎煮工艺进行研究，确定最佳工艺为：称取黄连41.40 g，名方甘草（水炙）41.40 g，黄连干姜41.40 g，物质桂枝41.40 g，量值人参27.60 g，传递半夏（汤洗）60.00 g，分析大枣42.00 g于砂锅中，经典基准加2000 mL水，名方浸泡60分钟，黄连以武火（2200 W）煮沸后，物质调节火力至文火（900 W）保持微沸，量值煎煮约60分钟后，传递趁热过滤，分析滤液放凉后加水调整体积至1200 mL。经典基准根据最佳工艺进行3批验证实验，结果显示指标性成分黄连碱、巴马汀、小檗碱、甘草苷、甘草酸、6-姜辣素、桂皮醛平均含量分别为4.52、5.83、15.84、1.70、2.95、1.28、1.39 mg·g-1，RSD分别为0.72%、0.74%、0.71%、0.86%、1.6%、1.3%、0.65%，说明黄连汤工艺稳定。

采用随机数表法，对各药味饮片批次进行随机组合及排序，见表2。按照最佳工艺制备18批黄连汤物质基准对应实物，编号为HLD1~HLD18。

2.2 黄连汤物质基准特征图谱方法的建立

2.2.1色谱条件

色谱柱：Merck Purospher Star LP RP-18 endcapped色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（含0.05mol·L-1磷酸二氢钾，磷酸调节pH为3.0，B）；梯度洗脱(0～7 min，10%~22% A；7～19 min，22%～23.5% A；19～28 min，23.5%～24% A；28～42 min，24%～35% A；42～52 min，35%～63% A；52～54 min，63%～10% A；54～56 min，10% A），流速：1 mL·min-1，检测波长：280 nm，柱温：25 ℃，进样体积：10 μL。特征图谱见图1。

5.甘草苷；10.黄连碱；11.巴马汀；12.小檗碱；14.桂皮醛；15.甘草酸；17.6-姜辣素

对黄连汤物质基准特征图谱进行特征峰归属，共归属17个特征峰，经对照品指认7个特征峰信息。其中1，2，3，6，7，8，9，10（黄连碱），11（巴马汀），12（小檗碱）号峰来源于黄连；4，5（甘草苷），15号峰（甘草酸）来源于甘草；13，14（桂皮醛），16号峰来源于桂枝；17号峰（6-姜辣素）来源于干姜；人参、半夏、大枣在此条件下没有色谱信息，后续将进行进一步研究。

2.2.2供试品溶液的制备

精密量取黄连汤物质基准对应实物2 ml至10 ml量瓶中，加入甲醇7 mL，再加水至刻度，使甲醇浓度为70%，称定重量，超声30分钟，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。同法制成各单味药、各阴性供试品溶液。

2.2.3 精密度考察

取同一供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件，连续进样6次。以小檗碱为参照峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD，结果各共有峰相对保留时间RSD＜0.39%，相对峰面积RSD＜2.8%，表明仪器精密度良好。

2.2.4 重复性考察

取同一份黄连汤物质基准对应实物，按2.2.2项下平行制备6份供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件进样。以小檗碱为参照峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD，结果各共有峰相对保留时间RSD＜0.65%，相对峰面积＜2.8%，表明方法重复性良好。

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